重组抗体开发

重组抗体，是使用重组DNA技术在体外构建，不受免疫系统限制而生产的单克隆抗体。因其克服了杂交瘤单抗的诸多缺陷，而成为研究的热门。重组抗体的开发是一项困难又复杂的任务，南京铭研生物在重组抗体开发方面具有丰富的经验，我们可以从多种渠道开发获得抗体序列，以进行重组抗体生产。

重组抗体开发的三种方法

目前，重组抗体的开发主要可以通过三种途径：① 通过噬菌体展示筛选；② 已有杂交瘤细胞测序；③直接B细胞克隆。开发的目的不仅是为了获得抗体，而是可以测得抗体的基因序列，以便后续的抗体生产和改造。

噬菌体展示技术

噬菌体展示技术是将scFv单链抗体或Fab展示于噬菌体表面的抗体库（Antibody library）制备技术。抗体库结合固相化技术和高通量筛选，可以方便快捷地得到亲和力较高的抗体，并对噬菌体进行测序以获得抗体序列。
噬菌体展示实验流程：

1. 从小鼠B淋巴细胞中扩增全套抗体的轻链和重链基因，并构建到噬菌体载体上，使噬菌体载体可以表达该抗体；
2. 数百万甚至数十亿个展示抗体片段的噬菌体，每个噬菌体携带不同的抗体，建立起一个抗体文库；
3. 采取固相或液相化的抗原与抗体库孵育，经过数轮的“吸附-洗脱-扩增”，筛选特异性抗体（抗体筛选的方法有多种，详细可参考：抗体库的筛选）；
4. 筛选分离具有高亲和力和稳定性的抗体并进行噬菌体测序，获得抗体序列，以此完成重组抗体的开发。

杂交瘤细胞测序

对已有的杂交瘤细胞测序，也是快速获得抗体序列的方法之一。杂交瘤细胞染色体易丢失，造成杂交瘤细胞退化，再次构建费时费力，通过对其测序，可以获得抗体基因序列，以便长期保存，并随时生产。
杂交瘤细胞测序实验流程：

1. 提供杂交瘤细胞，利用RACE技术获取mRNA;
2. RT-PCR获得cDNA，并扩增抗体的轻链和重链基因；
3. 抗体基因连接至T载体，并挑选阳性克隆；
4. 测序获得抗体基因序列，并进行生物信息学分析。

B细胞克隆

B细胞克隆是另一种开发重组抗体的方法。噬菌体展示技术依赖于重链和轻链的体外重组，产生和筛选在体内未发现的抗体。而直接B细胞克隆则保留了原始的重链和轻链抗体对。但是B细胞克隆需要使用整个B细胞进行开发，从新分化的B细胞一直到完全分化的B细胞（完全分化的B细胞是经过抗原刺激产生的浆细胞），而浆细胞仅占B细胞的0.1-1.0％，通过流式细胞术可以筛选获得分泌特异性抗体的浆细胞。
B细胞克隆实验流程：

1. 免疫动物（兔/鼠），并检测血清ELISA效价；
2. 一只动物的加强免疫并利用流式细胞术分离获得单个浆细胞（96孔板每孔一个细胞）；
3. 扩增每孔细胞的抗体的轻链和重链的基因序列，并克隆到哺乳动物细胞表达载体中；
4. 哺乳动物细胞表达该抗体并通过间接ELISA筛选最优效价的克隆；
5. 克隆的质粒测序并获得抗体的基因序列。

结论

一旦完成重组抗体的开发，即可进行大量生产，并且提供比杂交瘤抗体更可靠的活性。虽然开发过程复杂耗时且价格较为昂贵，但是当您在研究中需要长期多次使用时，重组抗体将会大大节约您的时间与成本。