抗体库构建与筛选

铭研生物提供噬菌体展示抗体库的构建与筛选服务。噬菌体展示（Phage display）技术是将scFv单链抗体或Fab展示于噬菌体表面的抗体库（Antibody library）制备技术。
抗体库结合固相化技术和高通量筛选，可以方便快捷地得到理想抗体。我们提供的噬菌体展示库解决方案，不仅仅是提供容量高达10⁸的抗体库（抗体来源包括人、鼠和兔等），甚至根据客户需求提供抗体库构建服务。

噬菌体展示库筛选服务

客户提供	标准交付内容	可定制的内容	周期	价格
抗原序列	抗体序列 抗体库 克隆载体 实验报告	抗体文库的选择 抗体表达 抗体标记等	7-9周	询问

如果需要定制抗体库，详情请联系铭研生物的抗体专家。

噬菌体展示库

经典的抗体产生需要杂交瘤细胞的生成，涉及动物免疫和细胞融合等步骤，制备时间长达数月。噬菌体表面展示技术直接略过了这两个步骤，由于抗体来源可以跨越物种，能直接提供人抗体，与此同时，也可以快速应用多种需要筛选的场景，例如抗体亲和力成熟等。

噬菌体展示库分类

原则上，噬菌体抗体库分为三大类，分别是：

• 天然抗体库（Naïve antibody library），基因来源人体或动物体内的血液、骨髓、脾脏和扁桃体内的B淋巴细胞。天然抗体库的优点在于可获得人抗体、针对所有天然抗原、库足够大，可直接获得高亲和力抗体，但缺点也比较多，比如库容量不如半合成和合成抗体库、构建费时费力等；
• 半合成抗体库（Semi-synthetic antibody library），其主要基于天然抗体库中的框架区和CDR1、CDR2区，随机合成扩增CDR3区DNA序列而构成的抗体库。CDR3区可以通过序列随机化和改变长度多样性提高库容量，也有设计人员通过将6个CDR区全部随机化，使得多样性高达10⁸；
• 合成抗体库（Synthetic antibody library），是根据抗体基因库信息涉及的纯人工合成的抗体库。全合成抗体库需要对抗体的CDR区有深入的了解，保留CDR区的通用或主干部分，设计可替换的基因区域，实现高度的随机化，带来巨大的库容量。

容量大且多样性丰富的抗体库更容易筛选得到理想抗体，所以抗体库的质量一般由容量和多样性这两个参数去评价。全合成抗体库的容量理论上是最大的，但也有需要解决的关键问题，比如骨架区的保守序。此外，还可以使用特定抗原免疫后的动物脾脏等构建的免疫抗体库（Immune antibody library），能更有针对性地筛选针对某一特定抗原的抗体。

噬菌体展示库的构建

在抗体库构建及筛选之前需要确认基因来源、抗体类型，进而选择展示形式。scFv、Fab、diabody、dsFv和minibody都具备建库的研究和应用，但最常见的形式还是以scFv为主。scFv载体系统大多是pHEN1和pCANTAB系列，Fab对应的是pComb3和pComb3H等载体系统。
Fab载体pComb3是将抗体的VH与CH1结构域与噬菌体外壳蛋白III上的C端结构相连接形成融合蛋白。表达Fab蛋白与噬菌体外壳蛋白pIII蛋白之间有（Gly4-Ser）的短肽相连，这样，重链与pIII形成的融合蛋白被置于Lac启动子控制下，翻译成的蛋白通过先导序列进入细菌的细胞膜间隙，重链与pIII镶嵌在膜上，轻链则独自分泌进入膜间隙，与重链结合形成活性的Fab抗体。需要注意的是，由于载体pComb3仅含有噬菌体F1的原始复制区域，加入辅助噬菌体VCSM13才能完成复制和包装成完整的噬菌体结构。
scFv载体的构建与Fab非常类似，首先VH与VL基因通过一段柔韧的连接肽（Linker）序列连接形成单链Fv基因，置于Lac启动子的调控下。由于先导序列的存在，融合蛋白被导入细胞间隙组装成scFv。在加入辅助噬菌体M13KO7后，scFv以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面。
随着现代技术的发展，更多的噬菌体展示技术也被报道出来。

噬菌体展示库的筛选

噬菌体展示库的高速发展源于其高效率的筛选能力，经典方法是采取固相或液相化的抗原与抗体库孵育，经过数轮的“吸附-洗脱-扩增”，可以富集到特异性抗体。噬菌体展示库的构建与筛选的流程如下图所示：

不过，正如上述所言，能否筛选到理想抗体被抗体库的质量所制约，不仅仅包括库容量、多样性，库的保存条件、扩增情况、筛选手段等也有重要的影响。因此，针对某一特定抗原，抗体库的筛选方法的选择策略需要认真制定，策略选择的思路如下：

一般来说，纯化抗原筛选比较简单，可以直接固相化和液化筛选。对非纯化的抗原，筛选过程稍复杂，需要借助其他手段。如磁珠活化细胞分离法，借助磁珠，使用抗原阳性细胞包裹，在加入抗原阴性细胞，当加入待筛选的噬菌体库后，特异性结合的抗体吸附在阳性细胞上，通过磁珠可以有效被分离出来。此外也有组织筛选法等其他非纯化抗原方法。